« Gélose EMB » : différence entre les versions

{{homon|EMB}}

[[Fichier:Coli levine.JPG|vignette|Culture de ''[[Escherichia coli]]'' sur gélose EMB]]

[[Fichier:Escherichia coli EMB.jpg|vignette|Aspect vert métallisé caractéristique d'une culture de ''[[Escherichia coli]]'' sur gélose EMB]]

La '''gélose EMB''' (de l'anglais ''Eosin Methylene Blue'') est un [[milieu de culture]] sélectif et différentiel employé en [[microbiologie]] pour l'isolement et l'identification des [[bacille (forme)|bacille]]s [[coloration de Gram|Gram]] négatifs (BGN). Ce milieu comporte un indicateur qui détecte la consommation du lactose et/ou du saccharose. Il a été mis au point en 1918 par M. Levine pour faciliter la distinction entre ''[[Escherichia coli]]'' et d'autres BGN, en particulier ''[[Klebsiella aerogenes]]'' (anc. ''[[Klebsiella aerogenes|Enterobacter aerogenes]]'')<ref>Levine M « Differenciation of B. coli and B. aerogenes on a simplified eosin - methylene blue agar » ''J Infect Dis.'' 1918;23(1):43-47. [https://www.jstor.org/stable/30080479 Accès libre]</ref>. Les travaux de Levine s'appuyaient sur une formulation similaire proposée en 1916 par J. Holt-Harris et O. Teague<ref>Holt-Harris JE, Teague O « A new culture medium for the isolation of bacillus typhosus from stools » ''J Infect Dis.'' 1916;18(6):596-600. [https://www.jstor.org/stable/30080303 Accès libre]</ref>.

== Principe ==

La base nutritive se compose pour moitié de [[peptone]] et pour l'autre moitié d'un mélange à parts égales de deux [[disaccharide]]s, le [[lactose]] et le [[saccharose]]. Le lactose est métabolisé par les [[Entérobactérie]]s dites « fermentaires » et le saccharose sert de glucide de secours pour d'éventuels variants lactose négatifs de ces bactéries.

Le [[bleu de méthylène]] est un inhibiteur qui limite la croissance des bactéries Gram positives. L'[[éosine]] ici utilisée dans sa forme Y (''yellowish'', jaunâtre) vire au noir en milieu acide ce qui permet de détecter l'acidité produite par les bactéries qui fermentent le lactose et/ou le saccharose. Lorsque le pH diminue suffisamment, les deux colorants interagissent en formant un complexe violet très sombre aux reflets verts métalliques caractéristiques<ref name="ASM">https://www.asmscience.org/content/education/protocol/protocol.2869, consulté le 02/06/21.</ref>.

L'[[hydrogénophosphate de potassium]] (K₂HPO₄) sert de [[tampon (chimie)|tampon]] pour amortir les variations de pH dues à la fermentation des sucres. L'[[agar-agar|agar]] est l'agent gélifiant.

== Lecture ==

L'aspect des colonies sur la gélose EMB reflète leur aptitude à acidifier les glucides présents.

Les colonies suspectes de ''Escherichia coli'' sont celles qui présentent après 18 à 24h d'incubation l'aspect caractéristique dit « en dos de scarabée » : coloration bleu-noir avec des reflets verts métallisés, limitée à la colonie et ne s'étendant pas au milieu environnant. Cet aspect, qui traduit l'acidification intense et rapide du lactose et/ou du saccharose, n'a cependant qu'une valeur d'orientation<ref name="ASM" />. D'autres tests sont nécessaires pour confirmer l'identification.

Les colonies roses à ambrées correspondent aux BGN qui acidifient faiblement ou lentement l'un des deux glucides. Il peut s'agir entre autres de ''[[Shigella]]'', ''[[Salmonella]]'', ''[[Klebsiella]]'' etc.

Les colonies incolores correspondent à des BGN « non fermentaires » (ou à certains Gram positifs résistants au bleu de méthylène) qui n'acidifient ni le lactose ni le saccharose : ''[[Proteus (bactérie)|Proteus]]'', ''[[Pseudomonas]]'' etc.

Pour 1000 mL de milieu<ref>https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8821, consulté le 02/06/21.</ref>{{,}}<ref>https://himedialabs.com/TD/GM317.pdf, consulté le 02/06/21.</ref> :

* peptone (quelconque) : 10 g

* lactose : 5 g

* saccharose : 5 g

* hydrogénophosphate de potassium : 2g

* éosinase Y : 400 mg

* bleu de méthylène : 65 mg

* agar : 13,5 g.

Ajuster le pH à 7,2 ± 0,2 à 25°C (après autoclavage).

== Variantes ==

Certaines sources distinguent deux types de gélose EMB selon que la formule comporte :

* soit un mélange à parts égales de 0,5% (m/v) de lactose et 0,5% de saccharose (formulation originale de Holt-Harris & Teague) ;

* soit 1% de lactose et pas de saccharose (formule modifiée par Levine).

Le terme « gélose Teague » peut servir à désigner la formule la plus ancienne, au substrat glucidique mixte, l'appellation « gélose Levine » étant réservée à la formule sans saccharose<ref>https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/LSG/manuals/IFU1400.pdf, consulté le 14/06/21.</ref>.

Le type de peptone peut varier selon les fabricants. D'autre part, la concentration d'agar peut être majorée à 1,5% (m/v) pour restreindre l'essaimage des ''Proteus'', mais dans ce cas leurs colonies prennent un aspect métallisé semblable à celui des colonies de ''E. coli''<ref name="ASM" />.

== Préparation ==

Aucun ingrédient n'étant thermosensible, il suffit de les dissoudre à chaud dans le volume correspondant d'eau distillée et de stériliser à l'autoclave (15 minutes à 121°C). Le mélange est ensuite réparti dans des contenants stériles.

== Notes et références ==

{{Références}}

* [[Milieu de culture]]

* [[Liste de milieux de culture]]

{{Palette|Milieux de culture}}

{{Portail|microbiologie}}

[[Catégorie:Milieu de culture|EMB, gélose]]